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武汉供卵合法化问题_气相色谱仪测定亚麻酸、EPA、DPA和DHA的含量
文章来源:http://whdyun.com  发布日期:2022-09-12
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一、气相色谱仪测定亚麻酸、EPA、DPA和DHA的含量的原理:

试样经酸水解后提取脂肪,其中α-亚麻酸、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳五烯酸(DPA)、二十二碳六烯酸(DHA)经酯交换生成甲酯后,通过气相色谱仪分离检测,以保留时间定性,外标法定量。

二、气相色谱仪测定亚麻酸、EPA、DPA和DHA的含量的试剂和材料:

2.1 氢氧化钾(KOH)。

2.2 盐酸(HCl)。

2.3 无水乙醚(C 2 H 5 OC 2 H 5 )。

2.4 乙醇(CH 3 CH 2 OH):体积分数≥95%。

2.5 石油醚:沸程 30℃~60℃。

2.6 正己烷(CH 3 (CH 2 ) 4 CH 3 ):色谱纯。

2.7 甲醇(CH 3 OH):色谱纯。

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2.8 无水硫酸钠(Na 2 SO 4 )。

2.9 试剂配制::氢氧化钾甲醇溶液(0.5 mol/L):称取2.8 g氢氧化钾,用甲醇溶解并定容至100 mL,混匀。

三、气相色谱仪测定亚麻酸、EPA、DPA和DHA的含量的标准溶液:

3.1 标准品:

3.1.1 α-亚麻酸甲酯(C 19 H 32 O 2 ):纯度≥99.0%。

3.1.2 EPA 甲酯(C 21 H 32 O 2 ):纯度≥98.5%。

3.1.3 DPA 甲酯(C 23 H 36 O 2 ):纯度≥98.0%。

3.1.4 DHA 甲酯(C 23 H 34 O 2 ):纯度≥98.5%。

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3.2 标准溶液的配制:

3.2.1 单个脂肪酸甲酯标准储备液(4.0 mg/mL):称取 100.0 mg α-亚麻酸甲酯、 EPA 甲酯、DPA 甲酯 、DHA 甲酯标准物质于 25.0 mL 容量瓶中,分别用正己烷溶解并定容至刻度,摇匀。此溶液应贮存于-18℃冰箱中。

3.2.2 脂肪酸甲酯混合标准中间液(1.0 mg/mL):分别吸取脂肪酸甲酯标准储备液 2.50 mL 于 10.0 mL容量瓶中,摇匀,亦为标准曲线最高浓度,临用时配制。

3.2.3 脂肪酸甲酯标准工作液:分别吸取脂肪酸甲酯中间液 0.40 mL、0.80 mL、1.0 mL、2.0 mL、4.0mL 于 10.0 mL 容量瓶中,用正己烷定容,此浓度即为 0.040 mg/mL、0.080 mg/mL、0.10 mg/mL、0.20mg/mL、0.40 mg/mL 的标准工作液,临用时配制。

四、气相色谱仪测定亚麻酸、EPA、DPA和DHA的含量的分析步骤:

4.1 试样制备:

4.1.1 试样处理:

4.1.1.1 固体试样:称取已粉碎混合均匀的待测试样 0.5 g~2 g(精确到 0.001 g)(含待测组分约 5 mg/g~10 mg/g )加入 50 mL 比色管中,加 8 mL 水,混匀后再加 10 mL 盐酸。

将比色管放入 70℃~80℃水浴中,每隔5 min~10 min 以涡旋混合器混合一次,至试样水解完全为止,约需 40 min~50 min。取出比色管,加入 10 mL 乙醇,混合。冷却至室温后将混合物移入 100 mL 具塞量筒中,以 25 mL 无水乙醚分次洗比色管,一并倒入量筒中。

密塞振摇 1 min。加入 25 mL 石油醚,密塞振摇 1 min,静置 30min,分层,将吸出的有机层过无水硫酸钠(约 5 g)滤入浓缩瓶中。再加入 25 mL 无水乙醚密塞振摇 1 min,25 mL石油醚,密塞振摇 1 min,静置、分层,将吸出的有机层经过无水硫酸钠(约 5g)滤入浓缩瓶中,按“再加入 25 mL 无水乙醚……,静置、分层、过无水硫酸钠”重复操作一次,将全部提取液用旋转蒸发仪于 45℃减压浓缩近干。用正己烷少量多次溶解浓缩物,转移至 25 mL 容量瓶并定容,摇匀。按 4.1.2步骤甲酯化处理。

4.1.1.2 油类制品:称取混合均匀的油类制品 0.2 g~1 g(精确到 0.001 g)(含待测组分约 10 mg/g~20 mg/g。)至 25mL 容量瓶中,加入 5 mL 正己烷轻摇溶解,并用正己烷定容至刻度,摇匀。按 4.1.2 步骤甲酯化处理 。

4.1.2 甲酯化

吸取待测液(4.1.1.1,4.1.1.2)2.0 mL 至 10 mL 具塞刻度试管中,加入 2.0 mL 氢氧化钾甲醇溶液 ,立即移至涡旋混合器上振荡混合 5 min,静置 5 min,加入 6 mL 蒸馏水,上下振摇 0.5 min,静置分层后,吸取下层液体,弃去后再反复用少量蒸馏水进行洗涤,并用吸管弃去水层,直至洗至中性(若有机相有乳化现象,以 4000 r/min 离心 10 min),吸取正己烷层待上机测试用。

五、气相色谱仪测定亚麻酸、EPA、DPA和DHA的含量的色谱条件:

色谱柱: 键合交联聚乙二醇固定相,柱长 30 m,内径 0.32 mm,膜厚 0.5 m 或同等性能的色谱柱。

柱温箱温度:起始温度 180 ℃,10 ℃/min 升温至 220 ℃,再以 8 ℃/min 升温至 250 ℃,保持13 min。

进样口温度:250 ℃;进样量 1 L,分流比 20∶1。

FID检测器温度:270℃。

载气:高纯氮气,流量 1.0 mL/min,尾吹 25 mL/min。

氢气:40 mL/min;空气 450 mL/min。

六、气相色谱仪测定亚麻酸、EPA、DPA和DHA的含量的结果计算:

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